肽不稳定性的原因
脱酰胺反应：在脱酰化反应中，asn / gln残基被水解形成Asp / glu。非酶催化的脱酰胺反应进行。Asn-Gly-结构中的酰胺基团更容易水解，并且分子表面上的酰胺基也比分子内的酰胺组更容易水解。
易氧化氧化多肽溶液有两种主要原因。一个是溶液中过氧化物的污染，另一个是多肽的自发氧化。在所有氨基酸残基中，满足，Cys和他，TRP，Tyr等最容易氧化。氧分压，温度和缓冲溶液也对氧化有影响。
水解：通过水解容易破裂多肽中的肽键。通过ASP形成的肽键比除其他肽键更容易断裂，尤其是ASP-Pro和ASP-聚乙烯肽键。形成错误的二硫键：二硫键或二硫键之间的交换可以形成错误的二硫键，导致三级结构和活性丧失的变化。
结果：除了GLY外，所有氨基酸残基的α碳原子是手性，并且在基础催化下容易发生外消旋反应。其中，ASP残留物最容易发生出定性。β-消除：β-消除是指在氨基酸残基的β碳原子上消除基团。Cys，Ser，Thr，Phe，Tyr和其他残留物可以通过β-消除降解。在碱性pH下易患β-消除，温度和金属离子也会影响它。变性，吸附，聚集或沉淀变性通常与叔结构和二级结构的破坏有关。
在变性状态下，肽通常更容易发生化学反应，并且难以回收它们的活性。在多肽变性的过程中，首先形成中间体。通常，中间体具有低溶解度并且易于聚集以形成聚集体，其又形成可见沉淀物。
提高肽稳定性的建议
- 定向诱变：替代残留物，使得通过遗传工程方法引起多肽不稳定性或引入可以增加多肽稳定性的残留物可以提高多肽的稳定性。
- 化学修饰：肽有许多化学改性方法，最多研究了PEG改性。PEG是一种水溶性聚合物化合物，可在体内可降解并且无毒。PEG和多肽的组合可以改善多肽的溶解度，可以调节生物相容性，提高热稳定性，抗抗蚀剂的抗蚀剂，降低抗原性，并延长体内半衰期。选择合适的修改方法和控制改性程度可以改善身体健康或改善原始生物活性。
- 添加剂：通过添加添加剂，例如糖，多元醇，明胶，氨基酸和某些盐，可以提高肽的稳定性。糖和多元醇在低浓度下力围绕蛋白质以围绕蛋白质，从而提高肽的稳定性。在冷冻干燥过程中，上述物质也可以代替水与多肽形成氢键以稳定多肽的自然构象，并且还可以增加冷冻干燥产物的玻璃化转变温度。此外，表面活性剂如SDS，TWEEN和PLURONIC可以防止肽表面吸附，聚集和沉淀。
冷冻干燥：一系列化学反应，例如肽，β-消除和水解等肽需要水参与，水也可以用作其他反应物的流动相。另外，水含量的降低可以增加多肽的变性温度。因此，冻干可以改善多肽的稳定性。
长肽合成及其溶液的困难
在长肽的合成中，我们总是面临矛盾，即随着序列的增长，缩合反应的空间阻断增加。为了完成反应，需要增加反应时间;然而，随着反应时间的增加，将发生副反应。越多，将产生缺乏残留物的一些靶肽。这些缺乏残留物的肽链也是在合成长肽期间产生的主要杂质。因此，在合成长肽期间，我们需要克服的主要困难是探讨更好的反应条件和反应方法，使氨基酸缩合反应可以更充分彻底地进行。同时，缩短反应时间，因为反应时间越长，副产品越长，副产物越复杂。
为此，经过多年的探索和积累，肽谷生物已经总结了以下经验：
- 对反应时间的准确和灵活控制：我们多年的肽合成中累积的经验使我们能够准确控制肽的反应时间，并在完全反应的副产物中找到平衡;
微波合成方法：我们使用微波法合成在合成过程中难以冷凝的一些氨基酸。该方法具有显着效果，大大缩短了反应时间，并减少了两种主要副产品的生产。
使用片段合成方法：当一些肽难以通过常规的合成方法合成并且难以纯化时，我们还将在多肽的某个区段中使用某些氨基酸的缩合，然后将它们整体冷凝给肽链。该方法还可以解决合成中的许多问题。
采用酰肼合成方法：通过酰肼法合成肽的方法是在固相中合成的N-末端Cys肽和C-末端肽酰肼之间的化学选择性反应，形成酰胺键，以实现肽连接。根据肽链中的Cys位置，该方法将整个肽链分成多个序列以单独合成，并且最终通过液相缩合反应获得靶肽。这种方法不仅大大缩短了长肽合成时间，而且还显着提高了产品的纯度，因此广泛适用于含有Cys的长链多肽的合成。
长肽纯化
长肽的特殊性不可避免地导致最终粗肽组分的复杂性。因此，长肽的HPLC纯化也是一个挑战;我们学到了很多经验，并在淀粉样蛋白系列肽的纯化过程中成功地使用。为了纯化，我们通过使用先进的设备，多种净化系统和反复分离，大大提高了我们的长肽净化的成功率。
